預包被 96 孔微孔板

標準

標準稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測試劑 A

檢測試劑 B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB 底物

停止解決方案

封板機

37°C 培養(yǎng)箱

多通道和單通道移液器以及無菌移液器吸頭

噴瓶或自動洗板機

1.5 毫升管

蒸餾水

吸收性濾紙

100 ml 和 1 L 量筒

酶標儀（波長：450 nm）

ELISA 搖床

1） 標準品：用推薦體積的標準稀釋劑緩沖液制備標準品，制成標準溶液。然后按照方案中的說明，使用標準稀釋劑緩沖液對標準溶液進行連續(xù)稀釋。

2） 洗滌緩沖液：按照實驗步驟中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3） 檢測試劑制備：計算所需工作溶液的總體積。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1：100 的比例稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B。

1） 設定標準、測試樣品和對照孔。

2） 將 100 μl 稀釋的標準品分裝到標準孔中。

3） 將 100 μl 標準稀釋液緩沖液分裝到對照（零）孔中。

4） 將 100 μl 稀釋樣品分裝到樣品孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時。

5） 將 100 μl 檢測試劑 A 分裝到每個孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時。

6） 洗滌 3 次。

7） 將 100 μl 檢測試劑 B 分裝到每個孔中。在 37 °C 下孵育 30 分鐘。

8） 洗滌 5 次。

9） 將 90 μl TMB 底物分裝到每個孔中。在 37 °C 下孵育 10-20 分鐘。

10） 分裝 50 μl 終止液。

11） 測量 450 nm 處的 OD。

使用前，將試劑盒組分和樣品平衡至室溫 （18 - 25 °C）。建議為每個測試繪制一條標準曲線。

1. 在預涂板上分別設置標準、測試樣品和對照（零）孔，然后記錄它們的位置。建議至少一式兩份測量每個標準品和樣品。

2. 將 100 μL 每種標準品、對照品和樣品加入適當?shù)目字?。用蓋子密封板，并在 37°C 下孵育 1 小時。

3. 取下蓋子，丟棄液體。

4. 向每個孔中加入 100 μl 檢測試劑 A 工作溶液。用蓋子密封板，并在 37°C 下孵育 1 小時。

5. 取下蓋子并丟棄溶液。用 1X 洗滌緩沖液洗滌板 3 次。

6. 向每個孔中加入 100 μL 檢測試劑 B 工作溶液，密封并在 37°C 下孵育 30 分鐘。

7. 棄去溶液，并按照上一步的說明用洗滌緩沖液洗滌板 5 次。

8. 將 90 μl TMB 底物分裝到每個孔中。用蓋子密封板，并在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。避免暴露在光線下。孵育時間僅供參考，最佳時間應由最終用戶決定。不要超過 30 分鐘。

9. 向每個孔中加入 50 μL 終止液。立即在 450 nm 處讀取。