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堿性木聚糖酶測試盒

簡要描述:堿性木聚糖酶測試盒(比色法)/堿性半纖維素酶測試盒(比色法) 堿性木聚糖酶(Basic Xylanase,BAX)測定試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2024-05-09
  • 訪  問  量:650

詳細介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應用領域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥

堿性木聚糖酶測試盒

微量法100T/48S

注意:正式測定之前選擇2+3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業(yè)堿的原料細胞壁以及β+葡聚糖,降低釀造堿物料的粘度,促進有效物質(zhì)的釋放,以及降低飼料堿的非淀粉多糖,促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)堿,BAX一般分離自最適生長pH為9 +11的微生物。

測定原理:

BAX在堿性環(huán)境堿催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進一步與3,5+二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應,在540nm處有特征吸收峰,反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過測定反應液在540nm吸光值增加速率,可計算BAX活力。

自備實驗用品及儀器:

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋,可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

緩沖液:液體65mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。(若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀,可60℃加熱溶解后使用)。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

粗酶提?。?/p>

  1. 發(fā)酵液:發(fā)酵液于8000g,4℃,離心15min,取上清,作為待測樣品。

  2. 酶干粉:稱約0.1mg,加1mL緩沖液溶解待測。

  3. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL緩沖液)進行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心10min,取上清待測。

測定操作表:

  1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調(diào)節(jié)波長至540nm。

  2. 操作表


對照管

測定管

樣品(μL)

60

60

緩沖液(μL)

90

90

試劑一(μL)


60

試劑二(μL)

90


混勻,蓋緊瓶蓋,50℃水浴,反應30min,立即沸水浴10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開,以免進水,改變了反應體系)

試劑一(μL)

60


試劑二(μL)


90

混勻,沸水浴顯色5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中540nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管+A對照管。每個測定管設一個對照管。

BAX計算公式:

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985

1. 按液體體積活力計算:

酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106

= 391× (ΔA+0.0293)

2. 按蛋白濃度計算:

酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

3. 按鮮重計算:

酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力(nmol/min/g鮮重)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W

= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W


150:木糖的分子量;T:反應時間,30min;稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5;

106:轉(zhuǎn)化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y = 1.4216x - 0.0293,R2 = 0.9985

1. 按液體體積活力計算:

酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106

= 782× (ΔA+0.0293)

2. 按蛋白濃度計算:

酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr

= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr

3. 按鮮重計算:

酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。

BAX活力(nmol/min/g鮮重)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W

= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W


150:木糖的分子量;T:反應時間,30min;稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5;

106:轉(zhuǎn)化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。


注意事項:

1. 吸光度變化應該控制在0.01~0.8之間,否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變;也可以延長或者縮短反應時間。

2. 試劑盒2+8℃保存,保質(zhì)期3個月,建議盡快使用。


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

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  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式,為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,加強網(wǎng)絡建設,提高公司內(nèi)部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

堿性木聚糖酶測試盒




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