谷氨酰胺酶（GLS)測試盒

 微量法 100管/96樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

GLS（EC 3.5.1.1）是酰胺基水解酶，催化天冬酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。

測定原理：

GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏試劑檢測氨增加的速率，即可計算其酶活性。

需自備儀器和用品：

臺式離心機、酶標(biāo)儀、96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和雙蒸水。

試劑組成和配制：

試劑一×2瓶，60 mL，4 ℃保存；

試劑二×1瓶，40 mL，4 ℃保存；

試劑三×1瓶，60 mL，常溫保存；

試劑四×1瓶，5 mL，常溫保存；

試劑五×1瓶，3 mL，常溫保存；

試劑六×1瓶，3 mL，常溫避光保存。

粗酶液提?。?/p>

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至420nm。

2、樣品測定（在EP管中加入下列試劑）：

混勻，37℃水浴1 小時

混勻，8000 g，25℃離心10 min；取上清液，在96孔板中加入下列試劑

混勻，室溫靜置15min，420nm處讀取測定管和對照管吸光值，計算ΔA=A測定管-A對照管。對照管只要做一管。

注意：

1、試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用。

2、ΔA（A測定管-A對照管）若出現(xiàn)負(fù)值，可能是酶活性較低，可將反應(yīng)時間1h延長到2h，相應(yīng)的在計算公式中除以2。

酶活性計算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 1.9244x + 0.0057，R2 = 0.9983；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值A(chǔ)。

1、血清（漿）GLS活性

單位定義：每mL血清（漿）每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。GLS(nmol /min /mL)＝ (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V反總÷V樣÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)

 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞GLS活性

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每mg蛋白質(zhì)每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。

GLS(nmol /min /mg prot)＝ (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)÷Cpr。

（2）按樣本鮮重計算：

單位定義：每g組織每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。

GLS(nmol/min /g 鮮重)＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)÷W。

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

單位定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。GLS(nmol/min/104 cell)＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ÷T ×1000       =0.7274×(ΔA -0.0057)

V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，60min；V反總：反應(yīng)體系總體積，1.05mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬; 1000，μmol到nmol換算系數(shù)。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購?？商峁W美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

谷氨酰胺酶（GLS)測試盒