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乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒

簡要描述:乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2024-05-06
  • 訪  問  量:675

詳細介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥

乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

AchE屬于絲氨酸水解酶,廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿(Ach)水解,在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。

測定原理:

AchE催化Ach水解生成膽堿,膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在412nm處有吸收峰,通過測定412 nm吸光度增加速率,計算AchE活性。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1支,4℃保存。臨用前加入1.3 mL試劑二,充分震蕩溶解。

試劑四:粉劑×1支,4℃保存。臨用前加入1.3 mL試劑二,充分震蕩溶解。

粗酶液提?。?/p>

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清液待測。

細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

血清等液體:直接測定。

測定操作:

  1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到412 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30min。

3. 取微量石英比色皿/96孔板,依次加入20μL上清液、160 μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻,于412nm處測定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2?!鰽測定管=A2-A1。

AchE活性計算:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

組織AchE活性

(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷(Cpr ×V樣)÷T

= 245×△A÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷(W ×V樣÷V樣總)÷T

= 245×△A÷W

細菌、細胞AchE活性

活性單位定義:每104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

= 245×△A÷細胞數(shù)量

血清AchE活性

活性單位定義:每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷V樣÷T

=245×△A

ε:TNB摩爾消光系數(shù),13.6×103 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積(L),200μL=2×10-4L;V樣總:提取液體積,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白濃度(mg/mL);V樣:加入上清液體積(mL),0.02 mL;W :樣品質(zhì)量;T:反應(yīng)時間(min),3 min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

  1. 組織AchE活性

(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷(Cpr ×V樣)÷T

= 490×△A÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷(W ×V樣÷V樣總)÷T

= 490×△A÷W

  1. 細菌、細胞AchE活性

活性單位定義:每104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

= 490×△A÷細胞數(shù)量

  1. 血清AchE活性

活性單位定義:每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷V樣÷T

=490×△A

ε:TNB摩爾消光系數(shù),13.6×103 L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積(L),200μL=2×10-4L;V樣總:提取液體積,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白濃度(mg/mL);V樣:加入上清液體積(mL),0.02 mL;W :樣品質(zhì)量;T:反應(yīng)時間(min),3 min。



上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

  2. 國外試劑的訂購??商峁W美實驗室品牌的采購方案。

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  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒






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