用于 qPCR 的 ProbeMasterMix FAST High ROX

（ProbeMasterMix FAST High ROX für die qPCR）

優(yōu)勢一覽

• 包括 500 nM ROX，用于基于探針的 qPCR

• 高熱穩(wěn)定性、熒光和靈敏度

• 變性時(shí)間短，最長 2 分鐘

• 優(yōu)化 2 步法 PCR 方案

• 熱啟動(dòng)技術(shù)可防止引物二聚體形成，無需在冰上移液，也無需立即進(jìn)一步處理

規(guī)格：
該 ProbeMastermix 是一種即用型 2 次預(yù)混液，含有 500 nM ROX™

初始變性時(shí)間
短，針對 2 步法 qPCR
優(yōu)化，等分試樣大?。? mL。

PCR 引物延伸 多重 PCR 低拷貝靶標(biāo) PCR 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR

One unit is defined as the amount of enzyme which will convert 10 nmoles of dNTPs to an acid-insoluble form in 30 min at 72°C under the assay conditions (25 mM TAPS (tris-(hydroxymethyl)-methyl-amino-propanesulfonic acid, sodium salt) pH 9.3 (25°C); 50 mM KCl; 2 mM MgCl2; 1 mM b-mercaptoethanol; and activated calf thymus DNA as substrate.

Sicherheits Hinweise / Safety

Klassifizierungen / Classification

eclass-Nr: 32-16-05-02

技巧

快速 PCR：
在進(jìn)行快速實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 時(shí)，考慮引物設(shè)計(jì)和靶標(biāo)大小非常重要。為了在快速循環(huán)條件下進(jìn)行高效擴(kuò)增，建議靶標(biāo)大小在 70 bp 至 200 bp 之間。目標(biāo)長度越短，總運(yùn)行時(shí)間越快。對于其他靶標(biāo)和其他引物組，必須通過實(shí)驗(yàn)確定退火步驟。

請使用以下方案作為靈感，因?yàn)槟枰鶕?jù)您的目標(biāo)大小和應(yīng)用的儀器優(yōu)化儀器設(shè)置。

在 LightCycler® 96 上使用 Genaxxon 預(yù)混液（不含 ROX）快速獲得實(shí)時(shí) PCR 結(jié)果

使用 LighCycler96 （Roche） 使用快速循環(huán)實(shí)時(shí) 2 步方案對不含 ROX 的 GreenMasterMix （2X） 或不含 ROX 的 ProbeMasterMix （2X） 進(jìn)行了測試;分別為快速 PAH12 Green LC 和快速 Pthr 探針 LC。
qPCR 設(shè)置：使用 GreenMasterMix （2X）（不含 ROX）或 ProbeMasterMix （2X）（不含 ROX），靶向 PAH12 （203 bp） 或 Pthr （75 bp） 的引物和 4 種濃度的 gDNA（40 ng、20 ng、10 ng 和 5 ng）。所有 DNA 濃度均以四次重復(fù)測試。見圖 1 和圖 2。PCR 反應(yīng)混合物在 LightCycler® 96 上運(yùn)行（對 ROX 無要求）。所應(yīng)用快速方案的儀器設(shè)置、運(yùn)行時(shí)間和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);將 Fast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr 探針 LC 與標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行比較;標(biāo)準(zhǔn) Pthr LC。見表 1.結(jié)果

：標(biāo)準(zhǔn) Fast Pthr 探針 LC 方案的運(yùn)行時(shí)間為 80.8 分鐘?？焖?PAH12 綠色液相色譜和快速 Pthr 探針液相色譜方案的運(yùn)行時(shí)間分別為 47.5 和 40.8 分鐘。所有協(xié)議時(shí)間均包括 samping 時(shí)間和 15 分鐘熱啟動(dòng)。如表 1 所示，F(xiàn)ast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr Probe LC 方案的確定標(biāo)準(zhǔn)令人滿意。此外，使用不含 ROX 的 Green 2x 預(yù)混液和快速 PAH12 Green 液相色譜方案進(jìn)行的熔解曲線分析證實(shí)了高特異性。

在 -20°C 下儲存。 僅供實(shí)驗(yàn)室使用！

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