RIPA 裂解液（強(qiáng)） (RIPA Lysis Buffer)  

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞、組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解后的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等。RIPA 裂解液的主要成分為 Tris-Hcl，NaCl，Triton X-100， sodium deoxycholate，SDS，可以有效裂解不同樣本并抑制蛋白降解。

RIPA 裂解液 50mL 

運(yùn)輸與保存方法冰袋運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。 

操作說明：對(duì)于組織樣品

1. 組織塊用冷 PBS 洗滌，去除血污。剪成小塊置于勻漿器中。

   2. 加入 10 倍組織體積本試劑（使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑）冰上全勻漿。

   3. 將勻漿液轉(zhuǎn)移至 1.5ml 離心管中，振蕩。冰浴 30min，期間用移液器反復(fù)吹打，確保細(xì)胞全裂解。 

   4. 12000g 離心 5min，收集上清，即為總蛋白溶液。 

對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

 1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞： 

a.用 PBS 沖洗細(xì)胞 2-3 次。最后一次全吸干殘留液。

b.加入適當(dāng)體積的細(xì)胞總蛋白提取試劑（使用前數(shù)分內(nèi)加入蛋白酶抑制劑）于培養(yǎng)板、瓶?jī)?nèi) 3-5 分鐘。期間反復(fù)晃動(dòng)培養(yǎng)板、瓶，使試劑與細(xì)胞充分接觸。 

c.用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞及試劑刮下，收集到 1.5ml 離心管中。 

2. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，每 6 孔板細(xì)胞加約 250 ul 細(xì)胞總蛋白提取試劑（在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑），振蕩。 

3. 冰浴 30min，期間每 10 分鐘用 200ul 移液器反復(fù)吹打數(shù)次，確保細(xì)胞全裂解。 

4. 12000g 離心 5min，收集上清，即為總蛋白。 

注意事項(xiàng)： 

對(duì)于組織樣品：每 50mg 組織約加入 1ml 的本試劑裂解。對(duì)于軟骨、皮膚等組織，可適當(dāng)減少試劑用量，以提高蛋白濃度。 

對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品： 

1. 正常細(xì)胞密度下，每個(gè) 6 孔板細(xì)胞加入 250ul 左右裂解液。其它類推。

   2. 樣本過量時(shí)裂解可能會(huì)出現(xiàn)較粘稠狀?？捎靡埔浩鞣磸?fù)吹打，直至呈液狀為止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液，或者使用超聲破碎儀。 

   3. 此試劑對(duì)人體有害，請(qǐng)適當(dāng)防護(hù)。

上海牧榮生物科技有限公司

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