多年來，已經(jīng)開發(fā)了許多技術(shù)，使科學(xué)家能夠提出和回答這些問題。一種非常古老的技術(shù)是血細(xì)胞計(jì)數(shù)器，它允許科學(xué)家手動(dòng)計(jì)數(shù)指定體積的細(xì)胞。簡單地說，血球計(jì)數(shù)板上的不同網(wǎng)格和正方形由精確的表面積定義。表面積乘以網(wǎng)格上方蓋玻片的高度可提供仔細(xì)指定的體積。

血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的不精確性是由一些因素引起的，而更現(xiàn)代的技術(shù)已經(jīng)改進(jìn)了這些因素。例如，依賴人類對(duì)網(wǎng)格上微小對(duì)象的解釋會(huì)引入用戶之間的差異，而多年的經(jīng)驗(yàn)會(huì)進(jìn)一步分層。玻片的缺陷加工意味著腔室高度很少是真正的 100 μm，這給方程式增加了可能導(dǎo)致與真實(shí)計(jì)數(shù)總體偏差的假設(shè)。

細(xì)胞計(jì)數(shù)的現(xiàn)代解決方案

自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

像 CellDrop 這樣的自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀通過利用算法每次都以*全相同的方式計(jì)數(shù)來克服這些挑戰(zhàn)。CellDrop 的 DirectPipette™ 技術(shù)還利用高精度電機(jī)來設(shè)置 100 μm 的精確腔室高度，每次都幾乎都美。自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀還受益于快速圖像采集，消除了用戶偏差并顯著提高了實(shí)驗(yàn)之間的一致性。

流式細(xì)胞儀

流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的另一種現(xiàn)代解決方案是流式細(xì)胞儀。流式細(xì)胞儀通過毛細(xì)管攝入細(xì)胞，然后以單列排方式通過一系列激光使每個(gè)細(xì)胞快速分析大量單個(gè)細(xì)胞。這些激光器除了檢測前向散射（細(xì)胞直徑）和側(cè)向散射（細(xì)胞密度或體積）外，還檢測與細(xì)胞表面結(jié)合的熒光團(tuán)。

流式細(xì)胞術(shù)可實(shí)現(xiàn)高通量分析，快速表征數(shù)千至數(shù)百萬個(gè)細(xì)胞，促進(jìn)高效數(shù)據(jù)采集。通常，分析設(shè)置為一直運(yùn)行，直到達(dá)到指定的單元數(shù)，例如 100 萬個(gè)單元。靶向表面蛋白的熒光抗體使研究人員能夠闡明不同亞群中細(xì)胞的百分比，從而識(shí)別分析的總樣品中的各種細(xì)胞類型。

流式細(xì)胞儀在細(xì)胞計(jì)數(shù)中的局限性

與任何技術(shù)一樣，流式細(xì)胞儀也有局限性。雖然流式細(xì)胞儀在了解有多少事件通過內(nèi)部檢測器方面非常出色，但了解包含這些事件的精確進(jìn)樣體積不太容易測量。對(duì)于某些流式細(xì)胞儀，內(nèi)部流體泵可以每年校準(zhǔn)一次，以確保進(jìn)樣體積足夠精確，從而獲得準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)。通常，泵不易校準(zhǔn)或根本不校準(zhǔn)，這可能導(dǎo)致細(xì)胞/mL 定量不準(zhǔn)確。此外，傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀通常無法提供空間信息或詳細(xì)的單細(xì)胞圖像。

互補(bǔ)技術(shù)：流式細(xì)胞術(shù)和成像

為了克服這些限制，專家們通常用成像流式細(xì)胞術(shù)來補(bǔ)充流式細(xì)胞術(shù)。成像流式細(xì)胞儀將高分辨率圖像捕獲與傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)原理相結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)詳細(xì)的流式細(xì)胞術(shù)圖像分析。這提供了有價(jià)值的空間信息和跨細(xì)胞群熒光強(qiáng)度的量化，從而顯著增強(qiáng)了細(xì)胞分析能力。成像流式細(xì)胞術(shù)還可以清楚地區(qū)分紅細(xì)胞和有核細(xì)胞，這對(duì)于準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)至關(guān)重要。

許多流式細(xì)胞術(shù)專家使用的另一種實(shí)用解決方案是在流式細(xì)胞儀上測量之前，使用另一種方法（例如自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。它結(jié)合了兩種技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，可提供精確的定量和詳細(xì)的表征。

使用熒光活力染料（如 AO/PI）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)可產(chǎn)生清晰的熒光圖像，從而直觀地確認(rèn)細(xì)胞活力狀態(tài)。