抗體是生物化學、細胞生物學和免疫學實驗室的重要檢測工具。鑒于用于無數(shù)應用的抗體和抗體片段種類繁多，有時找到合適的抗體和抗體片段是一項艱巨的任務，更不用說可能危及抗體依賴性實驗的廣泛問題。交叉反應性、批次間差異以及在未經(jīng)測試的應用中使用抗體等常見原因被認為是導致結果不一致的原因。在這里，我們分享了一些實驗室到實驗室的技巧，以選擇您研究目的的抗體。

定義您的蛋白質(zhì)靶標 – 了解蛋白質(zhì)靶標的生物學特性，因為蛋白質(zhì)靶標可能非常復雜，并且與相關蛋白質(zhì)的序列同一性或同源性可能會產(chǎn)生潛在的交叉反應性。使用 GeneCards 等數(shù)據(jù)庫來識別抗原的命名法和任何替代名稱，并使用 UniProt 獲得目標蛋白質(zhì)的氨基酸序列。

選擇正確的應用程序 – 選擇與您的研究最匹配的應用程序。這取決于您需要回答研究問題的數(shù)據(jù)類型。例如，Western blot 是研究蛋白質(zhì)濃度的應用;免疫組織化學和免疫細胞化學用于研究定位，因為它們與固定的細胞和組織一起工作;而 ELISA、FACS 和流式細胞術是研究蛋白質(zhì)相互作用和表達的合適技術。

確?？贵w適合您的樣品 – 由于靶標的序列和結構因物種而異，因此請使用已針對您感興趣的物種專門驗證的抗體。在這種情況下，請相信數(shù)據(jù)表：如果抗體已針對一種物種進行了驗證，則無法保證它對其他物種有效。

選擇兼容的抗體 – 不應假設已證明可在一種應用中檢測靶標的抗體在其他應用中也能檢測到靶標。免疫化學應用依賴于使用敏感和高度特異性的抗體。更具體地說，它們?nèi)Q于抗原識別靶蛋白的能力。為了實現(xiàn)有效的抗原-抗體相互作用，表位必須易于結合。有時抗原可能需要靶蛋白以天然和折疊形式存在，或以變性形式存在。

通過固定、pH 值變化或在凝膠電泳制備過程中，表位可能會發(fā)生變化，這可能會影響其與抗體相互作用的能力。例如，在 IHC 研究中，抗體可以識別冰凍組織切片中的表位，但該表位可能無法在已變性以進行 Western 印跡分析的樣品中獲得。

選擇宿主物種 – 通常，建議避免使用與目標樣品物種相同的宿主抗體物種，以避免干擾免疫球蛋白。選擇宿主物種時，請考慮針對一抗的宿主物種產(chǎn)生的二抗，并根據(jù)應用進行選擇。

研究產(chǎn)品數(shù)據(jù)表并準備好優(yōu)化您的方案 – 產(chǎn)品數(shù)據(jù)表通常包含許多重要細節(jié)，包括免疫原的描述、表位的性質(zhì)、宿主物種、交叉反應性和推薦的起始稀釋度。因此，在設置方案時需要考慮許多因素，例如封閉緩沖液、抗體稀釋劑、孵育步驟的長度和檢測方法。所有這些額外的細節(jié)將幫助您優(yōu)化實驗方案以實現(xiàn)成功的分析。

始終包括實驗對照 – 在規(guī)劃實驗時，對照是有助于了解結果是成功還是失敗的關鍵部分。大多數(shù)常見的實驗技術需要特定的控制來幫助解釋數(shù)據(jù)。例如，Western 印跡應始終包含上樣對照，而 IHC 和 IF 應始終具有多個陰性對照，以幫助區(qū)分信號與背景噪音。

陽性對照的示例可能包括重組蛋白或由已知可產(chǎn)生可檢測靶標水平的細胞系制備的裂解物;而陰性對照可能包括使用敲除樣品或省略一抗，這兩者都可以檢測到二抗引起的背景染色。

總之，盡管找到適用于特定應用的抗體有時仍然是一項艱巨的任務，但我們希望這些提示和指南能為您的搜索提供一些有用的起點。